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UNC. FACULTAD DE ODONTOLOGIA.

BIOLOGIA CELULAR.

TRABAJO PRÁCTICO MICROSCOPIA OPTICA.




AÑO: 2012

¿COMO SE PUEDE OBTENER LAS CÉLULAS PARA SU ESTUDIO?

INTRODUCCION
Las células en general son muy pequeñas y son transparentes a la luz visible, por eso no pueden ser observadas a simple vista. El tamaño de la mayoría de las células eucariotas oscila entre los 10 y 30 µm dediámetro, mientras que las células procariotas y los componentes subcelulares son aun menores. Por esta razón se utilizan diferentes tipos de microscopios, que por efecto de sus lentes combinadas poseen un poder de resolución mayor y de esa manera permiten obtener imágenes de la morfología externa e interna de las células. Los conocimientos actuales sobre las estructuras celulares se han obtenido conla ayuda del microscopio óptico, el microscopio electrónico de transmisión y el microscopio electrónico de barrido, entre otros.
En nuestro caso realizamos una actividad en la sala de microscopia de la facultad, que consistía en el extendido de las células del epitelio de la mucosa bucal mediante una técnica de citología exfoliativa, a partir de la cual pudimos observar y distinguir células denuestro epitelio bucal con los diferentes tipos de MO que disponíamos, adquiriendo nuevos conocimientos y reafirmando los que ya poseíamos.

MATERIALES Y METODOS.

Para realizar la citología exfoliativa de las células del epitelio bucal, lo primero que debimos colocarnos como medida de bioseguridad fue el guardapolvo y los guantes de látex; trabajamos sobre una mesa previamente limpia provistade una compresa descartable donde disponíamos de una bandeja con portaobjetos, hisopos, cubreobjetos, soporte para portaobjetos y reactivos como el etanol 90%, azul de metileno o,25, agua destilada, hipoclorito de sodio 1%.
Cada integrante extrajo material de su propia boca (mejilla) con un hisopo, obteniendo así células sueltas liberadas de las capas más superficiales del epitelio, en formanatural; continuando con el preparado histológico extendimos la muestra sobre la superficie de un portaobjetos fijándolo con etanol 90% por 2 o 3 minutos aproximadamente y descartando el excedente, luego coloreamos la muestra con azul de metileno o,25% ya que este permite distinguir detalles estructurales de células y tejidos para proporcionar un adecuado contraste a las estructuras, gracias a estacoloración se pueden observar fundamentalmente los núcleos de las células con un color azul y el citoplasma en un color celeste. Dejamos reposar durante 15 minutos luego retiramos el excedente y lavamos con agua destilada sobre la bandeja, por ultimo al preparado obtenido le colocamos una gota de agua destilada y cubrimos con el cubreobjetos. Finalizados todos estos pasos descartamos hisopos yguantes del lado del revés en recipiente de basura; los preparados fueron colocados en una solución de hipoclorito de sodio 1%.

RESULTADOS.
Con la muestra lista para ser examinada en el M.O, pudimos identificar células planas del epitelio estratificado que presentaban: citoplasma, membrana plasmática y núcleo.





La coloración utilizada fue azul de metilenoC16H18ClN3S, colorante nuclear, básico para tinción en Bacteriología y en combinación Eosina-Azul de metileno para Microscopía entre otras aplicaciones. Este colorante tiene carga positiva y se une a compuestos cargados negativamente llamados basofilós, por tener afinidad con colorantes básicos.

Permite distinguir detalles estructurales de células y tejidos proporcionándoles un adecuado contraste.Gracias a esta coloración se pueden observar fundamentalmente los núcleos de las células en un color azul, y el citoplasma en un color celeste. Esto se debe a la presencia de una considerable cantidad de ribosomas libres o de retículos endoplasmáticos rugosos, es decir que hay regiones basófilas en el citoplasma.

Una técnica histológica comprende el conjunto de procedimientos a los que se...
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