Métodos de caracterización, separación y purificación de proteínas usando como modelo suero sanguíneo, caseína y lisozima

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Métodos de caracterización, separación y purificación de proteínas usando como modelo suero sanguíneo, caseína y lisozima


RESUMEN
Las proteínas son uno de los focos de estudio más importantes para los bioquímicos desde que son una de las moléculas con funciones más diversas en los distintos organismos vivos. Para realizar un estudio deeste tipo de moléculas se vuelve importante saber determinar sus características más importantes, como también saber los métodos disponibles para obtener una muestra pura de la proteína de interés. En este trabajo se plantean primeramente como determinar características generales de una proteína y como separarlas a partir de estas sutiles diferencias, usando como modelo proteínas de suero sanguíneo ycaseína. Posteriormente se expone un proceso de purificación para una enzima con características bacteriolíticas presente en la clara de huevo, la lisozima. Adicionalmente a los pasos seguidos para purificar la lisozima se exponen los procesos realizados para corroborar la presencia de ésta en las fracciones obtenidas, una electroforesis y un dot blot.

INTRODUCCIÓN
Las proteínas sonmacromoléculas poliméricas formadas por cadenas de aminoácidos. Son esenciales tanto estructural como funcionalmente en todos los seres vivos, útiles en casos tan diversos como catálisis de determinadas reacciones como componentes de la membrana plasmática. Al momento de estudiar y describir determinados organismos y enfermedades relacionadas con falta de funcionalidad proteica se vuelve esencial logrardeterminar las distintas proteínas presentes en el organismo y las acciones que estas realizan. Por esto es que se vuelve fundamental lograr purificar, cuantificar y caracterizar distintas proteínas presentes en una muestra.
Al momento de caracterizar una proteína es de suma importancia la secuencia aminoacídica que la conforma. Son los aminoácidos que forman a una determinada proteína los que leotorgan características como amortiguador de pH, su punto isoeléctrico, un plegamiento determinado, su tamaño, los sitios de unión de una proteína, y por lo tanto su función biológica. A su vez, el determinar características de determinadas proteínas, nos permite diferenciar entre cada una de ellas y planear una forma eficaz para obtenerlas de forma pura y poder así cuantificar los distintoscomponentes de una muestra.
Las proteínas del suero sanguíneo son proteínas muy fáciles de obtener a partir de distintos animales, siendo además de un precio asequible en su forma comercial. Las proteínas de suero bovino son las más ampliamente utilizadas. Esto permite utilizar suero como modelo de estudio para determinar características básicas de las proteínas y para determinar la cantidad deproteínas totales presentes en una determinada muestra. Se sabe de antemano que la concentración de proteínas total en suero sanguíneo fluctúa entre 61 y 96 mg/ml. El suero está compuesto principalmente por albúmina, representando casi el 60% del total proteico del suero. El resto son esencialmente fibrinógeno y proteínas globulares llamadas seroglobulinas, las cuales a pesar de ser proteínasdistintas comparten características como la solubilidad y el tamaño.
Otro grupo de proteínas de fácil acceso es el de las caseínas, las cuales son fosfoproteínas que se encuentran en la leche y sus derivados. Son un conjunto heterogéneo de proteínas que se caracteriza por tener un punto isoeléctrico entre pH 4-5.
Con el fin de estudiar las características de las enzimas se vuelve interesante utilizarcomo modelo las proteínas presentes en el huevo de gallina, más específicamente en su clara. Esto permite tener una fuente de enzimas de bajo costo y realizar un proceso de purificación desde su fuente. Allí se encuentran diversas proteínas: ovoalbúmina, ovomucoide, ovomucina, ovoglobulinas, lisozima, etc. La lisozima, ampliamente conocida como muramidasa, es una proteína presente en abundancia...