PROCEDIMIENTO PARA LA PUESTA A PUNTO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS DE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS MEDIANTE LC/MS-MS

PROCEDIMIENTO PARA LA PUESTA A PUNTO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS DE RESIDUOS DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS MEDIANTE LC/MS-MS



I. García1, I. Benito2, L. Franco3, M.J. García4, M.T. Ortega5


Laboratorio de Salud Pública de Burgos, Junta de Castilla y León, Paseo Sierra de Atapuerca, 4, 09071 Burgos, Teléfono 947280106, Fax 947280125.
1 Email: garlomin@jcyl.es.
2 Email: benbarin@jcyl.es
3Email: framinlo@jcyl.es
4 Email: gargutmr@jcyl.es
5 Email: ortperma@jcyl.es

RESUMEN. En este trabajo se describe la estrategia seguida en el laboratorio para la puesta a punto de métodos de análisis de residuos zoosanitarios por cromatografía de líquidos con detección de espectrometría de masas, triple cuadrupolo (LC/MS-MS) para cumplir con los requisitos establecidos en la Decisión2002/657/CE. La estrategia descrita incluye el uso de diseño de experimentos para maximizar las señales proporcionadas por los equipos LC/MS-MS.

PALABRAS CLAVE. Residuos zoosanitarios, diseño de experimentos, LC/MS-MS, MRM.



1.- Introducción
La cromatografía de líquidos con detección de espectrometría de masas, triple cuadrupolo (LC/MS-MS) es una técnica cada vez más empleada en los laboratoriospara el análisis de residuos de medicamentos veterinarios.
La espectrometría de masas genera iones (en la fuente de ionización), los separa en función de su relación masa/carga (m/z) en la región analizadora (triple cuadrupolo) y los detecta. Como consecuencia, una parte fundamental del espectrómetro de masas es la fuente de ionización que se encarga de ionizar los compuestos de interés. En laactualidad existen varios tipos de fuentes de ionización: ionización por electrospray (ESI), ionización química a presión atmosférica (APCI), fotoionización a presión atmosférica (APPI), entre otras. También hay disponibles en el mercado fuentes combinadas de ionización por electrospray y por ionización química. La optimización mostrada en este trabajo, es independiente de la fuente empleada; semuestran dos casos, uno la optimización con fuente de ionización electrospray y otro la puesta a punto de un método con fuente de ionización multimodo (ionización combinada por electrospray y química).
Una vez que los compuestos se han ionizado, entran en la región analizadora que se encuentra en condiciones de alto vacío; en el caso del LC/MS-MS, el primer y el tercer cuadrupolo son analizadores demasas, es decir, permiten la selección y el filtrado de iones a partir de su relación m/z. Entre el primer y el tercer cuadrupolo se encuentra la celda de colisión.
En función de la forma de escanear o seleccionar los iones en la región analizadora existen diferentes modos de trabajo en LC/MS-MS. Modo scan en el que se registra un espectro de masas entre dos relaciones m/z dadas; modo SIM(selected ion monitoring) en el que se registra una única relación m/z; precursores MS/MS (precursor ion scan) en el que se determinan todos los iones precursores que generan un fragmento determinado; productos MS/MS (product ion scan) en el que se determinan todos los fragmentos generados a partir de un ion precursor dado; monitorización de reacción múltiple (MRM, multiple reaction monitoring) en el quese selecciona un ion precursor en el primer cuadrupolo (Q1), se fragmenta en la celda de colisión, posteriormente dos o más fragmentos resultantes se seleccionan en el tercer cuadrupolo (Q3) y finalmente se detectan.
La metodología que aquí se muestra, está orientada a la puesta a punto de métodos de análisis de residuos zoosanitarios por LC/MS-MS en modo MRM con selección de dos ionesfragmento. La razón por la cual se seleccionan dos fragmentos en el tercer cuadrupolo, es que la Decisión de la Comisión de 12 de Agosto de 2002, 2002/657/CE, que fija los criterios de funcionamiento exigidos a los métodos analíticos, establece un mínimo de 4 puntos de identificación para la confirmación de sustancias recogidas en el grupo A del Anexo I de la Directiva 96/23/CE y un mínimo de 3 puntos...