proteinas

Determinación de proteínas por el método Kjeldahl
El Método Kjeldahl es un proceso de análisis químico para determinar el contenido en nitrógeno de una sustancia química y se engloba en la categoría de medios por digestión húmeda Se usa comúnmente para estimar el contenido de proteínas de los alimentos.








El porcentaje de proteínas en la carne oscila entre el 15 a 25%.
Elmétodo Kjeldahl consta de 3 procesos:
1) Digestión: conversión del Nitrógeno (proveniente de las proteínas, por ejemplo) en ion amonio mediante calentamiento (a una temperatura de 400º C aproximadamente) en bloque de digestión con adición previa de ácido sulfúrico y catalizador (sulfato de cobre (II)), que desencadenan la conversión del nitrógeno de la muestra en amonio.
2. Destilación: Separaciónpor arrastre con vapor del amoníaco y posterior solubilización en una solución ácida de concentración conocida.
En esta etapa se adiciona NaOH a la disolución de amonio obtenida previamente, generándose NH3 (amoniaco) y vapor de agua, que arrastra al mismo.
La solubilización posterior en la solución ácida permite la conversión de NH3 (amoniaco) a catión amonio, el cual se encuentra junto con elexceso de solución ácida añadido. El NH3 puede recogerse en un medio de ácido bórico en exceso medido.
3. Valoración (con equipo de volumetría): Medición de la cantidad de ácido neutralizado por el amoníaco disuelto, lo que indica la cantidad de Nitrógeno presente en la muestra inicial. Según el medio de recogida en la destilación, el amonio se valora de dos formas:
Recogida sobre ácido fuerteen exceso medido: se emplea una base y el indicador rojo de metilo o Recogida sobre ácido bórico en exceso medido
Destilador y digestor kjeldahl (antiguo)








Destilador y digestor (digital)
Los aparatos más modernos (digitales) cuentan con sistema de destilación y digestión integrada en un mismo equipo. Este equipo se fabrica con 6 y 12 unidades de destilación y digestión almismo tiempo

Técnica:
Materiales, Reactivos y equipos
MATERIALES:
1 matraz de digestión Kjeldahl con capacidad de 125 ml.
1 matraz de Erlenmeyer de 10 ml.
1 matraz volumétrico de 100 ml.
1 mechero de Bunsen.
2 pinzas (nueces).
1 soporte universal
1 pipeta de 5 ml.
1 pipeta de 10 ml.
1 frasco gotero de 25 ml.
1 frasco lámbar con capacidad de 1 litro.
1 piseta grande con aguadestilada.
1 microbureta.
3 cuerpos de ebullición.
1 par de guantes de asbesto.
1 pinzas largas.
1 embudo de cristal chico o mediano.

EQUIPOS
Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).
1 aparato destilador micro Kjeldahl (1 por equipo).
Equipo de titulación

REACTIVOS
Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Ácidobórico al 2%.
Ácido clorhídrico 0.01N (solución valorada).
Hidróxido de sodio al 30%.
Ácido sulfúrico concentrado.
Mezcla catalizadora para la digestión: 2.5 g de dióxido de selenio + 100 g de sulfato de potasio + 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (proporcionada por la coordinación de laboratorios).
Indicador de fenolftaleína










DIGESTIÓN

1.- Pese exactamente0.15g de carne (triturada) en un matraz de micro-Kjeldahl cuidando que la muestra no se adhiera a las parédes o al cuello del matraz.
2.- Añada 2.5 ml. de H2SO4, dos perlas de ebullición y aproximadamente 1.0 g de mezcla catalizadora.
3.- Someta a digestión la muestra en el aparato de microKjeldahl bajo una campana de extracción, con el matraz ligeramente inclinado usando baja temperatura al inicioy aumentando el calor a medida que procede la digestión, rotando los matraces de vez en cuando para asegurarse de que se digiera toda la muestra. La digestión terminará cuando el color de la muestra sea azúl-verde claro. El proceso tomará aproximadamente 90 minutos.
4.- Enfríe el matraz durante unos 4 minutos para que no se endurezca al solidificarse la muestra.
5.- Añada 7 ml. de H2O...